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omega試劑盒的詳細(xì)操作方法介紹News
omega試劑盒的詳細(xì)操作方法介紹
更新時(shí)間：2020-05-13 點(diǎn)擊次數(shù)：2195次
omega試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗雞IGFBP-4抗體包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的雞IGFBP-4與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。
依次加入生物素化的抗雞IGFBP-4抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素。抗雞IGFBP-4抗體與結(jié)合在包被抗體上的雞IGFBP-4結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。
加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過(guò)氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值，雞IGFBP-4濃度與OD450值之間呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出樣品中雞IGFBP-4的濃度。
omega試劑盒的詳細(xì)操作過(guò)程：
1、ADP試劑盒；omega試劑盒使用前請(qǐng)先將試劑盒在室溫下平衡半小時(shí)。
2、空白孔不加樣，只加顯色劑A，B和終止液用于調(diào)零。
3、標(biāo)準(zhǔn)品孔：每孔加入稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品50μl，零孔加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液50μl，然后加入生物素抗原工作液50μl。
4、樣品孔：加入樣品50μl，然后加入生物素抗原工作液50μl。
5、輕輕搖晃，蓋上封板膜，37℃培養(yǎng)箱中孵育30min。
6、將25倍濃縮洗滌液用蒸餾水25倍稀釋后備用。
7、次洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
8、加入50μl親和素-HRP到標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中，輕輕搖晃，蓋上封板膜，37℃培養(yǎng)箱中孵育30min。
9、第二次洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
10、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。
11、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)。
12、測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后10分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
13、計(jì)算：omega試劑盒根據(jù)濃度和OD值算出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的回歸方程，建議用計(jì)算軟件進(jìn)行計(jì)算，推薦使用ELISAcalc進(jìn)行計(jì)算，擬合模型選用logistic曲線(xiàn)（四參數(shù)）。
